顯色反應避光對ELISA試劑盒實驗的重要性

    這類反應的定性結果可以用肉眼判斷。目視標本也無色或近于無色者判為陰性，顯色清晰者為陽性。但在ELSIA試劑盒中，正常人血清反應后常可出現(xiàn)呈色的本底，此本底的深淺因ELISA試劑盒的組成和實驗的條件不同而異，因此實驗中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應為不含受檢物的正常血清或類似物(見3.6)。在用肉眼判斷結果時，更宜用顯色深于陰性對照作為標本陽性的指標。此時酶催化無色的底物生成有色的產物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中，加入底物后的反應溫度和時間應按規(guī)定力求準確。ELISA試劑盒定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應時間，及時判斷。
    OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鐘后即不再加深，再延長反應時間，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色，顯色反應結束時加入終止液終止反應。OPD產物用硫酸終止后，顯色由橙轉向棕。
    TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反應觀察結果。但為保證實驗結果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當時間閱讀結果。TMB經HRP作用后ELISA試劑盒，約40分鐘顯色達，隨即逐漸減弱，ELISA試劑盒至2小時后即可*消退至無色。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基*(SDS)等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12-24小時)不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會使藍色轉變成，此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。